酿酒酵母超氧物歧化酶(SOD)基因的克隆和表达

通过PCR扩增技术从酿酒酵母中得到了Cu,Zn-SOD的结构基因,此基因被亚克隆到大肠杆菌质粒载体pT7-7,得到重组质粒pT7-7::SOD。利用EcoRI和PstI酶切pT7-7::SOD质粒,经琼脂糖凝胶电泳,DEAE-滤膜回收Cu,Zn-SOD结构基因片段,将其亚克隆到M13中,并转化大肠杆菌,得到了重组质粒M13::SOD。酶切和纯化后的SOD基因,定向克隆到酵母质粒载体pHZ-8的Smal和EcoRI位点上,构建成重组质粒pHZ-8-1。经转化酵母受体菌ZH-1和DP-1后得到了转化子,来自于ZH-1的转化子在非选择性条件下培养40世代后仍有95％以上细胞保留重组质粒。而来自于DP-1的转化子很不稳定。经蛋白提取、聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶活性测定结果表明,来自于ZH-1转化子中SOD的表达量约为细胞可溶性蛋白的15％,并具有生物活性。