具有天然N端的小鼠高活性IL-18的高效表达与纯化附视频

被引：2

作者：

杨永杰

陈松华

葛锡锐

机构：

[1] 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

[2] 中国科学院研究生院

[3] 中国科学院研究生院上海

[4] 上海

来源：

现代免疫学 | 2005年 / 06期

关键词：

IL-18; RT-PCR; 克隆; 表达; 纯化;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392.1 [免疫生物学];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

IL-18是IL-1家族成员,与IL-1β相似,IL-18也是以前体形式合成,其成熟和分泌需要Caspase-1的作用。我们正确克隆了小鼠IL-18全长cDNA,并成功构建了真核表达载体pcDNA3-proIL-18,能在真核细胞COS7中得到正确表达;为了得到具有天然N端的成熟IL-18(mIL-18),IL-18cDNA上Caspase-1的识别位点被转换成FactorXa的作用位点,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,IPTG能大量诱导GST-IL-18融合蛋白的可溶性表达,经一步亲和纯化后,能得到30～50mg融合蛋白/升菌;经过FactorXa作用融合蛋白,能得到大量(5～8mg/升菌)、高纯度(>95%)的mIL-18。与商品化的IL-18相比,所得mIL-18能诱导小鼠脾细胞表达更高水平的IFN-γ,表现出更强的生物学活性,这为进一步在小鼠系统中研究IL-18的功能、人成熟IL-18蛋白的高效表达、纯化以及其后可能的临床应用奠定了基础。

引用

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