PCR-ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立PCR ELISA检测HBVDNA的方法学 ,探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规PCR引物用地高辛标记 ,使扩增产物带有地高辛标记成份 ,再通过亲合素 生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯板小孔中 ,通过固相探针与HBVDNA扩增产物进行杂交 ,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应 ,经NPP显色 ,根据其A4 0 5nm值大小 ,推算样品中HBVDNA模板含量。建立PCR ELISA的最佳实验条件为PCR循环次数为 30次 ,杂交温度 37℃ ,杂交时间 1h ,批内变异系数为 9 4% ,批间变异系数 16 9% ,在 6 0例乙肝患者血清标本检出率为 70 % (4 2 /6 0 ) ,而常规凝胶电泳检出率为 46 7% (2 8/6 0 ) ,两者具有显著性差异 (χ2 =6 6 7　P<0 0 1)。