核酸扩增产物的量化酶免疫通用型检测方法

目的以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ＲＮＡ（ＲＮＡ）核酸扩增产物的量化酶免疫（ＥＩＡ）通用型检测方法及试剂，以准确评价疗效，指导治疗。方法选择合适的扩增循环数使聚合酶链反应（ＰＣＲ）在“平台期效应”出现前即停止；同时将第２次ＰＣＲ所用的引物进行生物素标记，使扩增产物带有生物素标记成分，再通过固相包被的链霉亲合素进行捕获、氢氧化钠解链变性、荧光素标记的ＨＣＶ特异性探针杂交以及辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的抗 荧光素酶标抗体反应后，ＴＭＢ显色测定，通过显色反应颜色的深浅，反映样品中ＨＣＶ ＲＮＡ模板的情况。结果ＨＣＶ ＲＮＡ扩增产物的ＥＩＡ检测结果表明：所建立的方法操作简便、重复性好、特异性强、敏感度高、结果判断客观准确，而且可以反映样品中病原体核酸模板量的多少；干扰素治疗期间，ＨＣＶ感染的慢性丙型肝炎患者不同时间系列血的动态检测结果提示，在临床监测治疗、评价疗效上，本方法具有较大的指导意义。结论所建立的方法可以成为一种通用型检测技术，用于量化分析病毒、细菌等致病因子及人类某些基因（如ＨＬＡＢ２７）的核酸扩增产物的研究，具有广阔的应用前景。