MAD2 RNA干扰载体的构建及其对胃癌细胞生长的影响

被引：4

作者：

杜昱蕾 ^{[1
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尹芳 ^{[1
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杨桂涛 ^{[2
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谢华红 ^{[1
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宋久刚 ^{[1
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刘杰 ^{[1
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樊代明 ^{[1
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机构：

[1] 第四军医大学西京医院消化内科肿瘤生物学国家重点实验室

[2] 第四军医大学西京医院医教部科研科

来源：

细胞与分子免疫学杂志 | 2006年 / 03期

关键词：

有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2); RNA干扰技术; 胃癌; 细胞周期;

D O I：

10.13423/j.cnki.cjcmi.003900

中图分类号：

R735.2 [胃肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的构建MAD2(有丝分裂阻滞缺陷蛋白2)特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制MAD2基因表达对胃癌细胞生长和细胞周期的影响。方法构建MAD2siRNA真核表达载体,脂质体法将pSilencer3.1空载体和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/MAD2-siRNA2真核表达载体分别导入人胃癌细胞系SGC7901。稳定转染后Westernblot和RT-PCR检测胃癌细胞内MAD2蛋白及mRNA水平的表达情况,挑选出抑制效果最好的单个克隆。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测纺锤体抑制剂长春新碱作用后,胃癌细胞MAD2-siRNA转染组和空载体组细胞周期的分布。结果成功构建MAD2siRNA真核表达载体,转染胃癌细胞SGC7901可使其MAD2蛋白及mRNA表达显著下调。MAD2表达降低的胃癌细胞生长速度明显增快(P<0.01),经长春新碱作用后不能被阻滞于有丝分裂期。结论小干扰RNA技术可以有效地特异性抑制胃癌细胞纺锤体检查点关键蛋白MAD2的表达。MAD2的抑制可使胃癌细胞SGC7901生长加速,增殖能力增强,同时减弱纺锤体抑制剂长春新碱阻滞细胞周期的作用。

引用

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