柴胡加龙骨牡蛎汤加减通过p38 MAPK通路改善CKD小鼠PFC突触可塑性及抑郁行为研究

目的探讨柴胡加龙骨牡蛎汤加减（CLMD）对慢性肾脏病（CKD）小鼠抑郁行为的作用及可能机制。方法 3月龄雄性C57BL/6小鼠60只,分为对照组、模型组、氟西汀组、CLMD低剂量组、CLMD中剂量组和CLMD高剂量组。除对照组外,其余5组小鼠先予0.2%腺嘌呤饮食喂养2周。中药干预组分别予2.36、4.725、9.45 g·kg-1·d-1的CLMD灌胃,氟西汀组予10 mg·kg-1·d-1氟西汀灌胃,对照组、模型组予生理盐水灌胃,共计6周。糖水偏好测试、强迫游泳实验检测小鼠抑郁行为表型,Western blot法检测前额叶皮层（PFC） p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、脑源性神经营养因子（BDNF）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）、磷酸化CREB（p-CREB）、突触后致密蛋白95（PSD95）、突触素（SYN）、生长相关蛋白43（GAP43）和突触囊泡膜蛋白（SYP）表达;免疫荧光法检测PFC脑区核内p-CREB的表达;Golgi-Cox染色检测PFC树突棘密度;ELISA法检测外周及PFC炎性因子水平及血清肌酐、尿素氮水平。结果行为学检测结果显示:与对照组相比,模型组不动时间增加,糖水偏好指数下降（P<0.01）;与模型组相比,给予中、高剂量CLMD干预后小鼠不动时间下降（P<0.01）,糖水偏好指数增加（P<0.05,P<0.01）,CLMD中、高剂量组与氟西汀组之间差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果显示:与对照组相比,模型组小鼠PFC中p-p38 MAPK/p38 MAPK表达增加（P<0.01）,BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达下调（P<0.01）;与模型组相比,CLMD中、高剂量组,氟西汀组小鼠p-p38 MAPK/p38 MAPK表达下调（P<0.01）,BDNF、p-CREB/CREB、PSD95、SYN、GAP43、SYP表达增加（P<0.01）。免疫荧光结果显示:与对照组相比,模型组PFC的p-CREB核内荧光水平明显降低（P<0.01）;与模型组相比,CLMD中、高剂量组,氟西汀组p-CREB核内荧光强度增加（P<0.05,P<0.01）。Golgi-Cox染色结果显示:与对照组相比,模型组小鼠PFC树突棘密度降低（P<0.01）;与模型组相比,CLMD中、高剂量组,氟西汀组小鼠PFC树突棘密度增加（P<0.01）。ELISA法检测结果显示:与对照组相比,模型组PFC及外周血清中炎性因子水平增加（P<0.01）,血清尿素氮、肌酐水平增加（P<0.01）;与模型组相比,氟西汀组及CLMD中、高剂量组PFC及外周血清中炎性因子水平下降（P<0.05,P<0.01）,CLMD中、高剂量组血清尿素氮、肌酐水平下降（P<0.05,P<0.01）,氟西汀组尿素氮、肌酐水平无明显变化。结论 CLMD能调节中枢炎症状态,改善PFC突触可塑性,减轻CKD小鼠抑郁症状,同时可能通过影响外周炎症状态延缓CKD小鼠肾脏功能恶化。