抗真菌蛋白Rs-AFPs基因克隆与序列分析

从开花后50～90d的萝卜种子中提取总RNA，逆转录合成CDNA第一链，通过PCR反应，得到Rs－AFP1和Rs－AFP2基因扩增产物。采用T－载体克隆技术，将二者分别插入pBluescript／Eco-RV—T克隆载体，得到重组质粒PGR－1和PGR－2，用其转化宿主菌E．coliDH5α，从阳性菌落制备测序用质粒DNA样品，在ABI370ADNA测序仪上测序。结果表明，所得Rs－AFP1和Rs－AFP2基因的PCR产物分别为327bp和293bp，二者的编码序列长均为243bp，包括起始密码和终止密码，共编码80个氨基酸，是完整的功能单位。所测序列与资料报道序列比较，其编码序列分别相差2bp和3bp，同源性为99．17％和98．75％。