生菜CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立

被引：10

作者：

禹明森 ^{[1
]}

李翔 ^{[1
]}

高马也 ^{[2
]}

杨蕾 ^{[2
]}

倪迪安 ^{[2
]}

王应祥 ^{[1
]}

机构：

[1] 复旦大学生命科学学院植物科学研究所

[2] 上海应用技术大学生态技术与工程学院

来源：

植物生理学报 | 2017年 / 53卷 / 04期

关键词：

生菜; 农杆菌介导遗传转化; 基因编辑; CRISPR/Cas9;

D O I：

10.13592/j.cnki.ppj.2017.0088

中图分类号：

Q943.2 [植物基因工程]; S636.2 [莴苣（生菜）];

学科分类号：

071007 ; 090102 ; 090202 ;

摘要：

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成功应用于多种植物基因组的编辑,但是在生菜中鲜有报道。本研究拟在生菜（Lactuca sati va L.）中建立CRISPR/Cas9基因编辑体系。首先根据生菜FANCM基因序列设计靶位点,构建Lsfancm-CRISPR/Cas9载体。然后以生菜子叶作为外植体,通过农杆菌侵染、共培养、愈伤组织诱导、芽再生及生根培养等过程,对生菜进行农杆菌介导的遗传转化,共获得24株T0代转基因阳性植株。进一步对靶位点序列进行PCR并测序分析,发现4株转基因生菜的靶位点发生基因编辑,产生fancm杂合突变体,并且在T1代植株中鉴定到纯合突变体。以上结果表明,本研究已成功将CRISPR/Cas9基因编辑体系有效地运用于生菜中,该体系的建立可为将来生菜的基因功能研究及分子育种提供重要的技术参考。

引用

页码：736 / 746

页数：11

共 16 条

[1] 共转化Atpsy和folE基因提高生菜类胡萝卜素和叶酸含量 [J].

付雪晴 ;

郭新波 ;

尤丽佳 ;

唐岳立 ;

程海祺 ;

王国丰 ;

唐克轩 .

上海交通大学学报(农业科学版), 2012, 30 (06) :22-31+35

[2] 禽流感抗原基因NA导入生菜的研究附视频 [J].

范亚丽 ;

李进 ;

阮颖 ;

刘春林 .

湖南农业科学, 2012, (05) :13-16

[3] 正交设计优化皱叶生菜离体再生体系 [J].

朱春燕 ;

雷建军 ;

周浩 ;

吴敏 ;

陈清 ;

陈燕珍 ;

杨素华 ;

俞守义 .

热带医学杂志, 2008, (04) :313-316

[4] 生菜生物技术育种研究进展 [J].

付雅丽 ;

牛瑞生 ;

樊建英 ;

赵璇 ;

王虎 ;

刘铁铮 .

江西农业学报, 2007, (10) :94-95+117

[5] 生菜遗传转化体系的建立及转基因研究 [J].

邓小莉 ;

周岩 ;

常景玲 .

云南植物研究, 2007, (01) :98-102

[6] TDZ对香椿愈伤组织诱导及芽增殖生长等的影响 [J].

张小红 ;

张红燕 ;

武军 ;

闵东红 ;

康冰 ;

李军超 .

西北农林科技大学学报(自然科学版), 2002, (05) :35-39

[7] 叶用莴苣离体培养和植株再生 [J].

朱路英 ;

刘玲 ;

孟祥栋 ;

张振贤 .

园艺学报, 2002, (02) :181-182+197

[8] 人小肠三叶因子(hITF)基因在生菜中的整合与表达 [J].

左晓峰 ;

张晓钰 ;

单龙 ;

肖传英 ;

何笃修 ;

茹炳根 .

植物学报, 2001, (10) :1047-1051

[9]

The CRISPR/Cas9 system for plant genome editing and beyond[J] . Luisa Bortesi,Rainer Fischer. Biotechnology Advances . 2014

[10]

RNA-Guided Genome Editing in Plants Using a CRISPR–Cas System[J] . Kabin Xie,Yinong Yang. Molecular Plant . 2013 (6)

← 1 2 →