一种新的RHD合子型直接测定方法

目的　建立简易的RHD合子型直接测定方法。方法　根据RHD基因序列和RHD基因缺失的原理设计两对引物 ,分别特异性针对RHD基因第一外显子和融合Rh盒子 ,再引入一对内对照引物 ,建立新的双管复式PCR方法 ;并用于检测 15 2份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本、以及 35 9份已知Rh表型样本的RHD合子型。检测结果与使用近期报道的限制性片段长度多态性(RFLP)技术的鉴定结果相比较。结果　 15 2份已知RHD基因序列和基因型的DNA样本包括 92份Rh阴性、2 8份D放散型、3例部分D表型、5例弱D型及 2 4例Rh阳性样品 ,全部样品的RHD合子型PCR检测结果均与已知的基因型相符合 ,可直接判断RHD(+) /RHD(+)、RHD(+) /RHD( )和RHD( ) /RHD( )三种合子型 ;35 9份已知Rh表型的样本 ,包括 12例孕妇配偶、18名家系成员、4 8例Rh阴性及2 81例Rh阳性捐血者 ,PCR检测结果 ,除一例外 ,均与RFLP结果一致。该个例PCR检测为RHD(+) /RHD( )杂合型 ,而RFLP结果为RHD( ) /RH1D( )纯合型 ,由于个例为Rh阳性表型 ,肯定存在至少一条RHD基因 ,所以显然RFLP检测下游Rh盒子出现假阴性。结论　双管PCR技术鉴定RHD合子型 ,简便、快速 ,具有较高的准确率 ,可常规用于临床或血库实验室。