表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建

被引：8

作者：

程坚

刘秀梵

彭大新

吴艳涛

机构：

[1] 扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室

[2] 扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州

[3] 扬州

来源：

农业生物技术学报 | 2002年 / 02期

关键词：

鸡Ⅱ型干扰素; 重组鸡痘病毒; 表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

S859.797 [];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

以插入鸡Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)cDNA序列的重组质粒AIFN为模板,根据鸡痘病毒早晚期启动子PE/L的序列设计上游引物,鸡IFN-Ⅱ基因的cDNA3'端序列设计下游引物,采用PCR法扩增包括启动子PE/L和鸡IFN-Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段定向插入鸡痘病毒转移载体1175中,获重组转移载体1175IFN,用以转染已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡(Gallusgallus)胚成纤维细胞(CEF)。1175IFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了表达IFN-Ⅱ的重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-IFN-Ⅱ。以细胞病变抑制实验证实,rFPV-IFN-Ⅱ感染的CEF表达了具有抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的鸡IFN-Ⅱ。rFPV-IFN-Ⅱ(M.O.I=0.01)感染CEF72h后,培养上清中IFN-Ⅱ的表达量为1280U/mL。动物实验表明,rFPV-IFN-Ⅱ接种雏鸡7d或14d后,其在体内表达的IFN-Ⅱ可显著减轻载体鸡痘病毒对1日龄SPF雏鸡体重增长的抑制作用。

引用

页码：152 / 155

页数：4

共 4 条

[1] 中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达 [J].

王志亮，彭大新，张如宽，焦新安，崔虹，侯云德，刘秀梵 .

病毒学报, 1996, (01) :48-54

[2]

表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因及共表达糖蛋白B和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用[D]. 彭大新.扬州大学. 2001

[3]

传染病预防与控制高技术[M]. 江苏科学技术出版社 , 徐文忠主编, 1996

[4]

Modulationofantiviralimmuneresponsesbyexogenouscytokines:effectoftumornecrosisfactor-α,interleukin-1α,interleukin-2andinterferon-γonimmunogenicityofaninactivatedrabiesvaccine .2 SchijnsVECJ,ClassenIJTH,VermeulenAA,etal. JGenVirol . 1994

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