肺炎链球菌蛋白PspA诱导人类单核细胞生产炎症介质和趋化因子的研究

被引:4
作者
邓济甦 [1 ]
曹炬 [1 ]
徐蕾 [2 ]
机构
[1] 重庆医科大学附属第一医院检验科
[2] 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室
关键词
肺炎链球菌; 单核细胞; IL-6; CCL2; CCL4;
D O I
10.13431/j.cnki.immunol.j.20130065
中图分类号
R378.14 [];
学科分类号
摘要
目的原核表达肺炎链球菌表面的毒性蛋白(pneumococcal surface protein A,PspA)并加入到人类单核细胞的培养基中,检测该蛋白对人类单核细胞释放炎性细胞因子和趋化因子的影响。方法将重组质粒pET-32a(+)/PspA转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白并纯化;通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白。再将PspA蛋白加入到人类单核细胞的培养基中共孵育,ELISA检测培养基上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、CXCL8、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5浓度的差异;最后,将放线菌素D或者放线菌酮也加入到细胞培养基中,ELISA方法检测其对PspA蛋白促单核细胞合成炎性细胞因子的干预作用。结果重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白相对分子质量约为70 000,纯化后用肠激酶切除融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白(相对分子量为50 000);ELISA试验表明PspA蛋白刺激人类单核细胞后,单核细胞系合成和释放到培养基上清的IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5显著增加(P<0.05);而加入了放线菌素D或者放线菌酮后,PspA蛋白刺激人类单核细胞释放IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5的能力明显减弱。结论重组的PspA蛋白可以诱导人类单核细胞重新合成和分泌炎性细胞因子IL-6和趋化因子CXCL8、CCL2、CCL4、CCL5,揭示了天然免疫的效应细胞—单核细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,将有助于制定新的战略来控制肺炎链球菌侵入性疾病。
引用
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