穗花杉ISSR引物反应条件的优化与筛选

在研究穗花杉(Am entotaxus aragotaenia)的遗传多样性过程中,为了获得清晰、重复性好ISSR扩增结果,对影响ISSR-PCR的多个因素包括模板浓度、Taq酶的选择和用量、Mg2+和dNTPs浓度及退火温度等指标等进行了筛选和优化,确定了穗花杉ISSR-PCR分析的最适扩增条件:20μL PCR反应体系中,2μL 10×Taq酶配套缓冲液,1.8 U Taq聚合酶(上海生工公司),0.2μmol.L-1引物,0.18 mmol.L-1dNTP,1.5～2.5 mmol.L-1MgC l2,10 ng.μL-1模板DNA。用来自不同居群7个个体,以100个ISSR引物进行PCR扩增,筛选出扩增效果较好的10个引物。得到了92个位点,其中45个多态性位点,多态性位点比例为49%。