从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化

被引:23
作者
戴佳锟 [1 ,2 ,3 ]
李燕 [4 ]
马齐 [1 ,2 ]
关正君 [3 ]
张超 [3 ]
张艳婷 [3 ]
赵荣荣 [3 ]
尉亚辉 [3 ]
机构
[1] 陕西省科学院酶工程研究所
[2] 陕西省酶工程技术中心
[3] 西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术省部共建重点实验室
[4] 陕西省微生物研究所
关键词
毕赤酵母; 超声破碎法; 人脂联素蛋白; Western Blotting免疫印记技术;
D O I
暂无
中图分类号
TQ936.2 [各种蛋白质];
学科分类号
083602 [酶(蛋白质)工程];
摘要
建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件进行优化。结果表明:在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下,超声破碎条件为超声破碎功率450W、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s),此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/L PMSF,虽对细胞破碎率并无显著影响,但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。
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