地高辛标记的cDNA探针检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒及马铃薯Y病毒

被引：12

作者：

杜国英

王锡锋

周广和

机构：

[1] 中国农业科学院植物保护研究所

[2] 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室

[3] 北京

[4] 植物病虫害生物学国家重点实验室

来源：

植物病理学报 | 2004年 / 01期

关键词：

TMV; CMV; PVY; 地高辛标记探针; 斑点杂交;

D O I：

10.13926/j.cnki.apps.2004.01.013

中图分类号：

S432.41 [];

学科分类号：

090401 ;

摘要：

根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行体外扩增,分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段,并克隆到pGEM-T easy质粒载体上,以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1:1 000、1:10 000、1:320,检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1:100、1:100、1:10,而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。

引用

页码：75 / 79

页数：5

共 7 条

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