三叶木通RAPD最佳反应体系的研究

RAPD技术是一种新的分子标记技术,DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。为获得高质量的木通属植物基因组DNA,本文采用SDS法、改良CTAB法、高盐低pH值法提取三叶木通总DNA。结果表明,高盐低pH值法不适用于木通属植物DNA的提取;改良CTAB法是合适的DNA提取方法,它们获得DNA模板纯度高、质量好,可直接用于RAPD分析。同时,对RAPD反应条件中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合木通属植物RAPD分析应用的体系,其组成为:反应液总体积为25μL,2.5μL 10×PCR缓冲液、0.16 mmol/L dNTPs2、.0 mmol/L Mg2+、0.64μmol/L引物、1 U/μL Taq酶4、0 ng/25μLDNA模板。PCR循环体系为:94℃,4 min-[-94℃,30 s-37℃,90 s-72℃,60 s-]-72℃,5 min,40个循环。