铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析中反应条件优化方案的探讨

被引：8

作者：

叶明亮

王全立

机构：

[1] 济南军区总医院!济南

[2] 军事医学科学院野战输血研究所!北京

来源：

军事医学科学院院刊 | 2001年 / 03期

关键词：

铜绿假单胞菌; 随机扩增多态性DNA; 聚合酶链反应; 反应体系; 反应曲面设计;

D O I：

暂无

中图分类号：

R378 [病原细菌];

学科分类号：

摘要：

目的 :筛选出反应体系的最佳优化方案及最佳扩增条件 ,用于铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析 (RAPD)。方法 :应用单因素设计和反应曲面设计进行RAPD反应体系的优化 ,同时比较不同的退火温度、延伸温度及热循环仪类型对RAPD指纹图的影响。结果 :单因素设计明显受到多因素间交互作用的影响 ,从而使优化的反应体系具有多样性 ;反应曲面设计得出相对稳定的优化反应体系 (关键成分浓度 )为 :Mg2 + 2 .0mmol/L、引物 0 .5 μmol/L和模板 0 .5ng/μl。退火温度以38～ 4 3℃、延伸温度以 62～ 72℃为最佳。结论 :反应曲面设计是优化RAPD反应体系的最佳方案。扩增条件中退火和延伸温度分别以 38～ 4 3℃和 62～ 72℃为最佳

引用

页码：186 / 189+194 +194

页数：5