北方黑土土壤细菌16S rDNA扩增体系的优化

被引：4

作者：

李秋红

吴凤芝

机构：

[1] 东北农业大学园艺学院

来源：

土壤学报 | 2008年 / 02期

关键词：

土壤细菌16S rDNA; 降落PCR; 优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S154.3 [土壤微生物学];

学科分类号：

071012 ; 0713 ;

摘要：

采用降落PCR方法扩增目的基因,设计两次正交试验对PCR反应体系中的各组分浓度进行筛选,同时对退火时间、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明,适合北方黑钙土土壤细菌16S rDNA扩增体系为:在25μl体系中,10×buffer2.5μl,DNA模板20ng,Mg2+2.5mmolL-1,dNTPs0.25mmolL-1,引物0.3μmolL-1,TaqDNA聚合酶1.5U。降落PCR扩增程序为:95℃,5min;95℃,45s;65～56℃,60s;72℃,90s;每两个循环降低1℃。95℃,45s;5.5℃,60s;72℃,90s;10个循环。最后72℃,10min。

引用

页码：341 / 347

页数：7

共 20 条

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