日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

被引：2

作者：

赵晓勤 ^{[1
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倪娟 ^{[1
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陈立侨 ^{[1
]}

顾志敏 ^{[2
]}

周志明 ^{[2
]}

机构：

[1] 华东师范大学生命科学学院

[2] 浙江省淡水水产研究所

来源：

华东师范大学学报(自然科学版) | 2006年 / 02期

基金：

国家自然科学基金重点项目;

关键词：

日本沼虾; PCR; 优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S917.4 [水产动物学];

学科分类号：

0908 ;

摘要：

以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为:在25μL反应体系中,10×Buffer 2.5μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95℃预变性5 min;接着35个循环包括95℃变性1 min,56℃复性50 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基I(cytochrome oxidase subunit I,COI),NADH脱氢酶亚基V(NADH dehydrogenasesubunit 5,ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.

引用

页码：68 / 74+87 +87

页数：8

共 9 条

[1] 扩增bFGF的条件优化及其真核载体构建 [J].