多重PCR检测三种重要食源性致病菌方法的建立及应用

被引：21

作者：

王慧

朱瑞良

谭燕玲

魏凯

王新建

孙振红

盛鹏程

机构：

[1] 山东农业大学动物科技学院/山东省动物生物工程与疾病控制实验室

来源：

中国农业科学 | 2011年 / 44卷 / 11期

关键词：

奇异变形杆菌; 沙门氏菌; 单核细胞增生李斯特氏杆菌; 多重PCR检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS207.4 [食品的微生物检验];

学科分类号：

摘要：

【目的】建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的多重PCR方法。【方法】根据奇异变形杆菌尿素酶合成的正向调节因子R基因(ureR)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和单核细胞增生李斯特氏杆菌编码溶血素O(LLO)的hlyA基因,分别设计3对特异性引物,对单基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件,如引物浓度、Tm值、模板量等的优化,建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌的稳定的单管多重PCR方法。【结果】针对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌所设计的3对引物分别能扩增出374、724和215 bp的目的条带,具有高度特异性,反应条件优化后,3种目的菌在105 CFU/mL均可同时扩增出较清晰条带(奇异变形杆菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌在104 CFU/mL浓度下仍然可见到条带),比单基因PCR低一个稀释度,并且人工模拟试验和市售食品试验检测结果稳定。【结论】该方法操作简单、快速、特异性强和灵敏度高,能够实现对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的快速诊断检测和监控。

引用

页码：2334 / 2340

页数：7

共 23 条

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