地拉罗司通过NF-κB信号抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化

目的探讨地拉罗司(deferasirox,DFS)体外对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响及相关机制。方法体外培养小鼠单核细胞RAW264.7,在核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的作用下诱导分化为破骨细胞,并使用不同浓度DFS(0、5、10、20μmol/L)进行干预,用CCK-8法检测细胞的增生活性,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞的形态并计数,实时定量PCR法检测细胞转录因子c-Fos、转录因子活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cell c1,NFATc-1)和组织蛋白酶K(cathepsin K,CTK)mRNA的表达,双荧光素酶报告基因系统检测核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)报告基因的表达,蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测细胞质蛋白、核蛋白NF-κB P65的表达。结果 DFS 0、5、10、20μmol/L组TRAP染色阳性的数目分别为63.67±3.78、55.33±3.21、34.00±5.00、16.00±4.58,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),提示DFS在实验浓度围内可减少RANKL诱导的RAW264.7细胞TRAP染色阳性的数目;DFS 0、5、10、20μmol/L组c-Fos mRNA表达量分别为1.83±0.11、1.46±0.13、0.88±0.13、0.30±0.09,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),NFATc-1 mRNA表达量分别为4.09±0.20、3.21±0.22、2.28±0.23、1.47±0.22,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),CTK mRNA表达量分别为3.51±0.08、3.21±0.19、2.55±0.22、1.50±0.19,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),以上结果提示DFS在实验浓度围内可下调c-Fos、NFATc-1、CTK mRNA的表达;在RANKL的基础上加入DFS后NF-κB报告基因的表达量为0.119±0.019,与RANKL组0.202±0.017比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),提示DFS可抑制RAW264.7细胞NF-κB报告基因的表达;在RANKL的基础上加入DFS后细胞质内NF-κB P65蛋白表达量为0.56±0.08,与RANKL组0.42±0.09比较明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),细胞核内NF-κB P65蛋白表达量为1.49±0.12,与RANKL组1.71±0.08比较明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),提示DFS可抑制RAW264.7细胞NF-κB P65向细胞核转位。结论DFS可能通过抑制NF-κB信号活性来抑制小鼠单核RAW264.7细胞向破骨细胞分化。