适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子构建及其适用性鉴定

被引：3

作者：

李俊毅 ^{[1
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李想 ^{[2
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褚庆华 ^{[2
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吕蓉 ^{[2
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张舒亚 ^{[2
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潘良文 ^{[2
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黄新 ^{[3
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朱水芳 ^{[3
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机构：

[1] 华东理工大学生物工程学院

[2] 上海出入境检验检疫局

[3] 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所

来源：

生物技术通报 | 2011年 / 04期

关键词：

PCR; RT73; 标准分子; 品系特异性检测; 实时荧光PCR;

D O I：

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2011.04.006

中图分类号：

S565.4 [油菜籽（芸薹）];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73,其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段。对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,结果表明,标准分子pEASY-RT73高度特异于转基因油菜RT73品系。以标准分子为标准品的普通PCR扩增中,3个目标片段的检测下限(LOD)均为10拷贝。实时荧光PCR检测的LOD均为25拷贝,定量下限(LOQ)均为50拷贝。以标准分子为标准品构建的标准曲线反应效率介于0.96-1.02间,相关系数均大于0.999。分别以PEP和HMG为内标准基因对5个盲样的测试结果显示,测量值与设定值间偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%间,SD小于0.20,RSD小于18.0%。因此,标准分子pEASY-RT73可很好地替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜RT73及其来源产品品系特异性检测。

引用

页码：76 / 83

页数：8

共 20 条

[11]

SN/T1204-2003植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法 .

[12]

农业部953号公告-3-2007转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜籽T45及其衍生品种定性PCR方法 .

[13]

农业部869号公告-5-2007转基因植物及其产品成分检测抗除草剂油菜籽MS8、RF3及其衍生品种定性PCR方法 .

[14]

Development of one novel multiple-target plasmid for duplex quantitative PCR analysis of roundup ready soybean. Zhang H,Yang L,Guo J,et al. Journal of Agricultural and Food Chemistry . 2008

[15]

SN/T1197-2003油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法 .

[16]

农业部869号公告-11-2007转基因植物及其产品成分检测抗除草剂油菜籽GT73及其衍生品种定性PCR方法 .

[17]

The agbios company. http://cera-gmc.org/index.php?evidcode=GT73%2C+RT73&hstIDXCode=&g Type=&AbbrCode=&atCode=&stCode=&coIDCode=&action=gmcropdatabase&mode=Submit .

[18]

农业部953号公告-4-2007转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜籽Oxy-235及其衍生品种定性PCR方法 .

[19]

Terms and definitions used in connection with refer-ence materials2nd edn. ISO Guide 30 . 1992

[20]

农业部869号公告-6-2007转基因植物及其产品成分检测抗除草剂油菜籽MS1、RF2及其衍生品种定性PCR方法 .

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