激光捕获显微切割技术在浅表膀胱移行细胞癌蛋白质组学研究中的应用及技巧

目的探讨使用激光捕获显微切割技术(LCM)提供的均一性的肿瘤、正常移行上皮细胞以及细胞外基质(Extracellular ma-trix,ECM)对浅表膀胱移行细胞癌进行蛋白质组学比较研究的可行性。并确定LCM中激光激发次数与提取总蛋白质之间的关系。方法按照Cap的尺寸准备标本,使用LCM技术捕获肿瘤细胞、肿瘤ECM、正常移行上皮细胞,激光激发次数均为250 000次。正常移行上皮显微切割后的ECM从玻片上刮除并收集。显微切割完毕后分别提取总蛋白,浓缩后BCA法检测样本蛋白浓度。结果BCA法检测结果为:膀胱移行上皮癌细胞为685.2μg/ml;正常移行上皮细胞为667.6μg/ml;肿瘤ECM为560.2μg/ml;正常ECM为460.2μg/ml。对照组蛋白浓度分别为1 321.2μg/ml、1 219.8μg/ml。结论LCM技术不会影响蛋白质产量,可以获得足量均一性移行上皮癌细胞、正常上皮细胞、相应ECM进行蛋白质组学的研究。进行显微切割前仔细的准备组织标本并掌握显微切割的技巧是实验成功的关键。