黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H5N1禽流感病毒感染

被引:27
作者
张晓玲 [1 ]
杨桥 [2 ,3 ]
代俊 [3 ]
顾潮江 [4 ]
许振辉 [3 ]
焦炳华 [2 ]
机构
[1] 中国水产科学研究院东海水产研究所
[2] 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室
[3] 病毒学国家重点实验室,武汉大学生命科学学院
[4] 哥伦比亚大学病理与细胞生物学系
基金
中国博士后科学基金;
关键词
H5N1禽流感病毒; 病毒感染; 黑色素; 谷胱甘肽; NF-κB途径;
D O I
10.13865/j.cnki.cjbmb.2009.04.003
中图分类号
S855 [兽医传染病学];
学科分类号
090505 [动物遗传育种学];
摘要
我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制,本研究选取黑色素及谷胱甘肽(GSH)为候选药物,通过Hoechst33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化;细胞凋亡流式细胞术定量分析表明,H5N1AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡,而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01);当20μg/ml黑色素及10mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89%(P<0.01);采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率;病毒血凝素(Ha)基因的RT-PCR检测结果表明,黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01);一氧化氮(NO)毛细管电泳(CE)激光诱导荧光检测显示,黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05);RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明,黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达(P<0.05),并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01),从而可有效抑制HNAIV感染.
引用
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