抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

被引：13

作者：

郑怡麟

何莹

陈安

易维京

胡川闽

机构：

[1] 第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室

来源：

第三军医大学学报 | 2013年 / 35卷 / 06期

关键词：

降钙素原; 原核表达; 单克隆抗体; 特性鉴定; ELSIA检测;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2013.06.002

中图分类号：

R392-33 [免疫学技术、设备及实验方法];

学科分类号：

100108 [医学免疫学];

摘要：

目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Western blot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgG1和IgG2a,最高效价为1∶1 024 000,亲和力最高可达到1.3×109L/mol;选取2-D7经Western blot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。

引用

页码：523 / 526

页数：4

共 7 条

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