高效液相色谱分离纯化血管紧张素转换酶活性抑制肽

采用分步高效液相色谱法首次从菠菜核酮糖双磷酸羧化酶(英文缩写为Rubisco)的胃蛋白酶 胰酶复合酶水解产物中分离纯化了血管紧张素转换酶(ACE)活性抑制肽。水解产物经ODS柱分离得到活性组分,这些活性组分再依次经过氨基柱(PhA)、氰基柱(CN)和硝基苯乙基柱(NPE)4种色谱柱分离后,得到4种高度纯化的、具有抑制ACE活性的多肽。经蛋白质序列自动分析仪测定,4种多肽的结构分别为MRWRD,MRW,IAYKPAG和LRIP VA。采用固相多肽合成法分别合成了这4种肽,并采用测定ACE活性抑制率的方法评价其活性大小,结果其抑制ACE活性50%的浓度值(IC50值)分别为2 1,0 6,4 2和0 38μmol/L。通过对照菠菜Rubisco的氨基酸序列,确认IAYKPAG来自于菠菜Rubisco的小亚基,而其余3种多肽则来自于菠菜Rubisco的大亚基。该法具有分离效率高、快速简单、干扰小、重现性好和不易丢失水解蛋白质中活性成分的优点。