人脑胶质瘤组织全长cDNA文库的快速构建与鉴定

被引：24

作者：

涂艳阳

徐如祥

杨志林

姜晓丹

吴曙光

陈一招

蔡颖谦

杜谋选

高杨

机构：

[1] 第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学药物研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学珠江医院神经医学研究所,第一军医大学药物研究所广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州

来源：

第一军医大学学报 | 2003年 / 09期

关键词：

胶质瘤; cDNA; 基因文库; 抑癌基因;

D O I：

暂无

中图分类号：

R739.4 [神经系肿瘤];

学科分类号：

100115 [医学神经生物学];

摘要：

目的采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技术,快速构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库。方法提取多份人脑胶质瘤组织标本的总RNA,混合后处理得到纯化的mRNA,利用CDSⅢ/3'PCR引物(含SfiⅠB酶切位点)反转录,用SMARTⅣOligo(dT)(含SfiⅠA酶切位点)作为mRNA5'端延伸出去的模板,合成多出一段SMARTⅣOligo(dT)互补序列的cDNA第一链,进而以此序列为引物合成全长的双链cDNA。双链cDNA经SfiⅠ(A&B)酶切后克隆入经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体,再经噬菌体包装蛋白包装成为cDNA文库。结果获得2.4×106个重组子,重组率达100%,文库扩增后,滴度达4.5×109 pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.2kb。结论成功构建高质量的人脑胶质瘤组织全长cDNA文库,为进一步筛选、克隆人脑胶质瘤抑癌基因及特异性表达基因奠定基础。

引用

页码：916 / 920

页数：5

共 2 条

[1]

A highly efficient method for long-chain cDNA synthesis using trehalose and betaine [J].

Spiess, AN ;

Ivell, R .

ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, 2002, 301 (02) :168-174

[2]

The construction of a cDNA expression library for the sheep scab mite Psoroptes ovis.[J].Alison J. Lee;R.Elwyn Isaac;David Coates.Veterinary Parasitology.1999, 3

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