基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞

被引：8

作者：

祝儒刚 ^{[1
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吕淑霞 ^{[1
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]}

刘月萍 ^{[3
]}

张良 ^{[3
]}

机构：

[1] 沈阳农业大学食品学院

[2] 辽宁大学轻型产业学院

[3] 沈阳农业大学生物科学技术学院

来源：

食品科学 | 2011年 / 32卷 / 08期

关键词：

叠氮溴化乙锭(EMA); 实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR); 海产品; 副溶血弧菌; 活细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS254.7 [水产制品的标准与检验];

学科分类号：

083204 ;

摘要：

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明:使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.0μg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×103～2.0×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×103CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响。该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。

引用

页码：219 / 225

页数：7

共 12 条

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