融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的体外研究

被引：4

作者：

叶翠莲 ^{[1
]}

杨致邦 ^{[2
]}

张吉 ^{[2
]}

黄进 ^{[2
]}

机构：

[1] 重庆工学院生物工程学院

[2] 重庆医科大学病原生物学教研室

来源：

中国免疫学杂志 | 2008年 / 02期

关键词：

幽门螺杆菌; IgY; 细胞空泡毒素; 粘附素; 体外试验; 中和作用;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100108 [医学免疫学];

摘要：

目的:研究VacA-HpaA融合蛋白的鸡卵黄抗体(IgY)的理化特性和生物学活性,为制备集预防与治疗为一体的抗H.pylori感染的制剂奠定基础。方法:以纯化的VacA-HpaA融合蛋白免疫产蛋鸡,水稀释法获取蛋黄抗体(VacA-HpaAIgY)。(1)用硫酸铵沉淀法纯化IgY后,用SDS-PAGE分析其纯度,Bradford法测定蛋白含量。(2)用间接ELISA法检测该IgY的耐热性、耐酸性及其对酶消化的耐受作用。(3)采用Western blot分析IgY的特异性并检测其效价。(4)用MTT法检测不同浓度VacA-HpaAIgY对细胞毒活性的中和作用。(5)用扫描电镜观察VacA-HpaA IgY对AGS细胞粘附的中和作用。结果:(1)该IgY纯度为60%,蛋白浓度为22g/L;(2)具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶能力;(3)Western blot分析显示IgY的特异性,在相对分子量约27000和30000处出现在相应的条带;(4)该IgY对VacA细胞毒活性有中和作用,且具有量效性和时效性;(5)IgY可阻止H.pylori菌体蛋白的粘附作用。结论:该IgY具有良好的理化和生物学特性,可用于制备抗H.pylori感染的防治制剂。

引用

页码：114 / 118

页数：5

共 4 条

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