京尼平苷及其体内代谢产物京尼平对HepG2细胞毒性的比较及机制研究

目的通过比较京尼平苷（geniposide,GS）及其体内代谢产物京尼平（genipin,GP）的Hep G2肝细胞毒性,进一步明确中药栀子致肝毒性的物质基础,并探讨其毒性作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度GS与GP的细胞毒作用;试剂盒法测定细胞中锰-超氧化物歧化酶（Mn-SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力及谷胱甘肽（GSH）含量;二乙酸-2',7'-二氯荧光素（DCFH-DA）染色法测定胞内活性氧（ROS）的变化;高内涵细胞分析技术（high content screening,HCS）进行多参数细胞毒性（细胞数量、核尺寸及形态、核DNA含量、细胞膜通透性、线粒体膜电位和细胞色素C）分析。结果 GS(20～1 000μmol·L-1)对Hep G2细胞无明显细胞毒作用（P>0.05）,50μmol·L-1GP可明显抑制Hep G2细胞增殖（P<0.05）,IC50值为（450.00±26.15）μmol·L-1;GS对胞内Mn-SOD、CAT、GSH、ROS含量无明显影响（P>0.05）,GP孵育细胞后,引起胞内Mn-SOD、CAT活性明显下降,GSH含量明显降低,并可明显增加ROS的生成（P<0.05或P<0.01）;50、500、1 000μmol·L-1GP可明显降低线粒体膜电位,促进细胞色素C的释放,升高细胞膜通透性（P<0.05或P<0.01）,500、1 000μmol·L-1GP组还可观察到明显的核固缩以及核荧光强度的升高,细胞数量的明显下降（P<0.01）,1 000μmol·L-1GS对上述细胞毒性参数无明显影响（P>0.05）。结论 GP是栀子致肝细胞毒性的直接物质基础,氧化应激所导致的线粒体损伤与细胞凋亡是GP引起肝毒性的主要机制。