黄瓜DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的优化

利用改良的 SDS方法提取黄瓜干种子与一步法提取的黄花苗总 DNA进行 RAPD扩增 ,其结果与传统的 CTAB和 SDS的结果一样。这两种方法不仅节约成本 ,且简单快速 ,大大降低了 DNA的提取难度 ,适宜黄瓜杂交种子纯度鉴定。不同组织材料对 RAPD无影响。研究了 RAPD的影响因素 ,改进及优化了 RAPD反应程序。结果表明 :Mg2 +浓度的范围为 1.5～ 3.0 mmol· L- 1 ,d NTPs浓度范围为 0 .15～ 0 .2 5 mmol· L- 1 ,Taq聚合酶浓度范围为 0 .5～ 1.5 U,模板DNA浓度为 2 0～ 10 0 ng,反应以及引物浓度为 0 .2～ 0 .4μmol· L- 1 。引物的碱基组成以及不同存放时间的引物对 RAPD扩增也有影响。 DNA预变性 94℃进行 4 min,94℃变性 30 s,37℃退火 30 s,72℃延伸 1min,循环 35次后 72℃再延伸7mi