结直肠癌患者粪便细菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的比较研究

被引：7

作者：

郭世奎 ^{[1
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包维民 ^{[1
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龚昆梅 ^{[1
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邵剑春 ^{[3
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陈弟 ^{[3
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王昆华 ^{[1
,2
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机构：

[1] 昆明医学院附属昆华医院

[2] 云南省第一人民医院普外一科

[3] 昆明市第一人民医院检验科

来源：

中国现代普通外科进展 | 2009年 / 12卷 / 11期

关键词：

结直肠肿瘤; 粪便; 细菌; 实时荧光定量PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 []; R735.3 [肠肿瘤];

学科分类号：

100112 [医学生物化学与分子生物学];

摘要：

目的:比较结直肠癌患者粪便细菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的优缺点及获得DNA的质与量。方法:以粪肠球菌作为试验菌株,分别采用标准菌株法、PCR扩增产物纯化法和PCR扩增目的片段割胶纯化法制备标准品,比较三者用于细菌实时荧光定量PCR标准曲线制作的好坏及用核酸蛋白检测仪Biophotmeter测定获得DNA的质与量。并将PCR扩增产物纯化法得到的产物进行测序。结果:PCR扩增目的片段割胶纯化法获得DNA的量及纯度均较低,为29.9±3.2和2.8±0.2,标准菌株法和PCR扩增产物纯化法的量及纯度均较高,分别为62.9±2.7及1.7±0.1,59.1±2.7及1.8±0.1;PCR扩增目的片段割胶纯化法与标准菌株法和PCR扩增产物纯化法相比,差异有统计学意义(P<0.05),标准菌株法和PC R扩增产物纯化法相比,差异无统计学意义(P>0.05),但以标准菌株法为佳。采用标准菌株法及PCR扩增产物纯化法,能获得很好的标准曲线(r=-1.00)。并且纯化产物序列与目的片段序列完全相同。结论:标准菌株法及PCR扩增产物纯化法制备标准品作荧光定量PCR检测比PCR扩增目的片段割胶纯化法更适合肠道相关分子微生态的研究。

引用

页码：939 / 942

页数：4

共 7 条

[1]

Real-time PCR for mRNA quantitation [J].