流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的方法学探讨

目的:探讨利用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球能力试验方法的灵敏性、稳定性以及易操作性,以期获得一套最优化的方案。方法:取ICR小鼠腹腔巨噬细胞,以原液和1∶1稀释液使用,采用三个微球浓度(5×106/孔、1×107/孔和1.5×107/孔),经1 h、1.5 h和2 h孵育,通过酶消化或细胞刮刀法将贴壁细胞消化处理后,利用流式细胞仪检测含不同数量荧光微球的巨噬细胞数值,计算吞噬率及吞噬指数。为验证实验条件的可靠性,取ICR小鼠每日灌胃金葵素胶囊30 d后,取腹腔巨噬细胞分别用流式细胞术和传统鸡红细胞方法检测吞噬能力。结果:微球浓度越高,吞噬率和吞噬指数越大;细胞浓度为1×105～2×105ml-1,孵育时间1.5 h,微球浓度为1.5×107/孔时吞噬率(PP)和吞噬指数(PI)最高(89.87%,1.54),孵育至2 h时出现下降(57.71%,1.51);细胞浓度对吞噬率和吞噬指数的影响与荧光微球浓度呈负相关。贴壁巨噬细胞经胰酶加EDTA消化后PP为44.51%,PI为0.68,单独使用EDTA消化后PP为37.92%,PI为0.57,均低于使用细胞刮刀处理组。流式细胞术法与鸡红细胞法测定金葵素胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力影响的结果一致,均为高剂量组吞噬率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小鼠腹腔巨噬细胞浓度调整为1×105～2×105,孵育1 h,1×107/孔微球浓度可使实验快速而又精确地反映巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,且与传统方法结果有良好的一致性。