细菌脂蛋白耐受中核转录因子核转位机制研究

被引：4

作者：

高丽杰

李崇辉

汪江淮

黄志强

机构：

[1] 解放军总医院全军肝胆外科研究所

[2] 爱尔兰科克大学外科学系

来源：

中国危重病急救医学 | 2011年 / 05期

关键词：

细菌脂蛋白; 耐受; 核转录因子-κB; p65; p50;

D O I：

暂无

中图分类号：

R733.71 [急性白血病];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的探讨细菌脂蛋白(BLP)耐受所致核转录因子-κB(NF-κB)活化受抑制的分子机制。方法以不同浓度BLP(10、100、1 000 ng/ml)预处理人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导BLP耐受,再以不同浓度BLP(0、10、100、1 000 ng/ml)刺激经BLP预处理(耐受组)或未经BLP预处理(对照组)的THP-1细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放,确定最适的BLP预处理和刺激浓度。然后按此条件处理细胞不同时间(0、0.5、1、2、6 h)并提取蛋白,用蛋白质免疫印迹法(Westernblotting)检测NF-κB亚单位p50和p65的表达、核转位及磷酸化情况。结果对照组中10、100、1 000 ng/mlBLP可剂量依赖性刺激THP-1活化并产生TNF-α(pg/ml:184.86±32.51、3 215.88±167.09、6 042.96±245.37),耐受组中100 ng/ml BLP预处理几乎完全抑制不同剂量BLP诱导的TNF-α释放。故最适BLP预处理浓度为100 ng/ml,刺激浓度为1 000 ng/ml。Western blotting检测表明,在BLP耐受的细胞质中p50蛋白表达明显高于对照组(0 h:542.9±15.6比272.8±13.2,0.5 h:558.0±16.9比236.4±11.8,1 h:524.7±17.5比211.6±9.8,2 h:584.9±15.6比222.4±12.3,均P<0.01),而两组间p65蛋白无明显差异。BLP刺激还可诱导对照组细胞中p50和p65发生核转位,即细胞核中p50和p65蛋白增加(1 h p50:344.2±13.6比79.0±5.2,p65:78.4±4.5比0,均P<0.05),而耐受组细胞核中p50和p65均无明显变化。另外,BLP刺激还可诱导对照组细胞中p65的536位丝氨酸发生快速磷酸化(0.5 h:0.67±0.08比0.04±0.01,1 h:0.71±0.11比0.04±0.01,均P<0.05),但是在BLP刺激的耐受组细胞中磷酸化p65蛋白水平无明显变化。结论 BLP耐受的THP-1细胞中抑制性NF-κB亚单位p50表达上调,而具有转活化能力的亚单位p65的核转位及磷酸化均受到抑制,可能是BLP耐受中TNF-α等NF-κB依赖的基因表达减少的分子机制之一。

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