抑肽酶基因的克隆和表达

抑肽酶作为天然非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,用途广泛。目前抑肽酶制品主要从牛肺中提取。用基因重组技术 ,将抑肽酶结构基因导入表达载体 pGrxA ,并在抑肽酶基因上游引入FXa识别位点。将重组质粒转化至OrigamiTM中 ,用异丙基硫代 β D半乳糖苷 (IPTG)诱导表达目的蛋白 ,产物以可溶性形式存在于胞内。将菌体超声破壁和离心 ,融合蛋白经分子筛层析和离子交换层析纯化后 ,用FXa切割该融合蛋白可得到N端不含多余氨基酸残基且与天然构像一致的活性抑肽酶。