均匀设计法在实时定量PCR检测条件优化中的应用研究

被引：1

作者：

宋莉

叶珏

王林

王慧

孟宪敏

机构：

[1] 北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病研究所中心实验室

来源：

中国分子心脏病学杂志 | 2010年 / 11卷 / 03期

关键词：

均匀设计; 实时定量; PCR; 心钠素; 条件优化; 实验因素;

D O I：

10.16563/j.cnki.1671-6272.2010.03.002

中图分类号：

R440 [];

学科分类号：

100208 ;

摘要：

目的探索均匀设计在优化实时定量PCR检测条件中的应用,确立心钠素基因实时定量的最佳条件。方法以乳鼠心肌细胞cDNA为模板,退火温度和引物浓度为影响因素,应用均匀设计法探索影响心钠素基因实时荧光定量PCR的扩增条件;量化不同实验条件下的扩增效果,在最优的扩增条件下建立ANP基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计法的试验设计,用8个试验点,完成了对温度和引物浓度2因素8水平的实验条件优化,建立了ANP基因实时定量PCR检测的最佳组合,为退火温度59.2℃、引物终浓度200μM。结论均匀设计是一种简便易行、快速经济的实时定量PCR检测条件的优化方法。

引用

页码：167 / 170

页数：4

共 6 条

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