肠出血性大肠杆菌O157:H7抗原基因及毒力基因多重荧光定量PCR检测方法的建立

被引：10

作者：

夏灿 ^{[1
,2
]}

蒋蔚 ^{[2
]}

刘迎春 ^{[2
]}

陈永军 ^{[2
]}

龙梦瑶 ^{[2
]}

薛俊欣 ^{[1
,2
]}

王权 ^{[2
]}

孙卫东 ^{[1
]}

机构：

[1] 南京农业大学动物医学院

[2] 中国农业科学院上海兽医研究所

来源：

畜牧与兽医 | 2016年 / 10期

关键词：

肠出血性大肠杆菌; O157:H7; 三重荧光定量PCR; 毒力基因; Taqman探针;

D O I：

暂无

中图分类号：

R440 [];

学科分类号：

100208 ;

摘要：

根据Gen Bank公布的大肠杆菌O157:H7的菌体抗原基因rfb E、鞭毛抗原基因fli C、溶血素基因hly A、紧密黏附素基因eae A和志贺样毒素基因stx1和stx2的序列,同源性比较后选择保守序列分别设计6对特异性的引物及相应的Taqman探针,rfb E/eae A、Stx1/hly A、fli C/Stx2探针5'端分别标记为FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3'端均标记为BHQ1荧光淬灭基团。通过优化反应体系和程序,建立2个能够快速、特异性地检测大肠杆菌O157:H7及其4个主要毒力基因的三重荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、rfb E、fli C、eae A、hly A、stx2的最低检测限分别为20、30、20、20、30和40拷贝数/μL;特异性试验证明,该菌与其他菌种无交叉反应;重复性好,变异系数均小于2%;检测过程耗时约1 h。将建立的荧光定量PCR体系应用到人工染菌模拟猪肉样品试验中,未富集或富集8 h后测得大肠杆菌O157:H7的最低检出限分别为200 cfu/m L与1 cfu/m L。以上结果表明,本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好,可作为同时快速检测肠出血性大肠杆菌O157:H7及其毒力基因的方法。

引用

页码：13 / 21

页数：9

共 10 条

[1] 肉类及蔬菜食品中EHEC O157污染分布及分型研究 [J].

赖则冰 ;

张淑红 ;

朱雪梅 ;

吴清平 ;

徐明芳 ;

张菊梅 .

现代食品科技, 2014, 30 (09) :290-296

[2] 上海市闵行区猪场中大肠杆菌O157:H7的分离鉴定及生物学特性研究 [J].

赵秋华 ;

王少辉 ;

刘萍萍 ;

姚建楠 ;

李颖利 ;

李蓓蓓 ;

邵东华 ;

史子学 ;

魏建超 ;

马志永 .

中国动物传染病学报, 2013, 21 (03) :38-44

[3] 江苏省徐州市出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的监测研究 [J].

刘加彬 ;

张雷 ;

杨晋川 ;

余加席 ;

孙传武 ;

郭慧 .

疾病监测, 2012, 27 (04) :285-287

[4] 广西畜禽大肠杆菌O157∶H7流行病学调查 [J].

李军 ;

禤雄标 ;

谢宇舟 ;

谢永平 ;

彭昊 ;

陈泽祥 ;

胡帅 ;

马春霞 ;

杨威 ;

许力干 ;

潘艳 .

中国人兽共患病学报, 2011, 27 (12) :1151-1155

[5]

大肠杆菌O157的分子流行病学调查和毒力因子研究[D]. 张书萧.吉林农业大学. 2012

[6] Dual priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR assay for specific detection of four diarrhoeagenic Escherichia coli in food [J].

Xu, Y. -G. ;

Liu, Z. -M. ;

Guan, X. -T. ;

Cui, L. -C. ;

Li, S. -L. .

LETTERS IN APPLIED MICROBIOLOGY, 2015, 61 (02) :146-152

[7]

Computed Tomographic Findings of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157 Infection: An Analysis of a 7-Case Regional Outbreak[J] . Toshitada Hiraka,Masafumi Kanoto,Yukio Sugai,Tsuguo Honma,Naohiko Makino,Yoshiyuki Ueno,Takaaki Hosoya. Journal of Computer Assisted Tomography . 2015 (3)

[8]

Future perspectives, applications and challenges of genomic epidemiology studies for food-borne pathogens: A case study of Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) of the O157:H7 serotype[J] . Mark Eppinger,Thomas A Cebula. Gut Microbes . 2015 (3)

[9]

A stochastic model for transmission, extinction and outbreak of Escherichia coli O157:H7 in cattle as affected by ambient temperature and cleaning practices[J] . Xueying Wang,Raju Gautam,Pablo J. Pinedo,Linda J. S. Allen,Renata Ivanek. Journal of Mathematical Biology . 2014 (2)

[10]

Ultraviolet Treatment of Orange Juice to Inactivate E. coli O157:H7 as Affected by Native Microflora[J] . Juan M. Oteiza,Leda Giannuzzi,Noemí Zaritzky. Food and Bioprocess Technology . 2010 (4)

← 1 →