巨桉miR156 CRISPR/Cas9载体构建

被引：6

作者：

欧阳乐军

袁玉梅

李莉梅

陈剀钊

戴发

机构：

[1] 广东石油化工学院

来源：

森林与环境学报 | 2018年 / 38卷 / 04期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

CRISPR/Cas9; 同源重组; 载体构建; 基因编辑;

D O I：

10.13324/j.cnki.jfcf.2018.04.016

中图分类号：

S792.39 [桉];

学科分类号：

0829 ; 0907 ;

摘要：

通过CRISPR/Cas9系统构建miR156家族中3个基因编辑载体(miR156A、miR156B和miR156C),为研究巨桉miR156家族基因的功能提供借鉴与参考。经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的miR156A-gRNA、miR156B-gRNA和miR156C-gRNA,用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后,经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析。结果表明,利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因mcherry的巨桉miR156家族CRISPR/Cas9载体系统,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100%。

引用

页码：488 / 493

页数：6

共 9 条

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