热休克蛋白70对肠上皮细胞缺氧/复氧后线粒体功能及能量代谢的影响

目的了解Ad-热休克蛋白70(HSP70)对缺氧/复氧损伤后肠上皮细胞线粒体功能及能量代谢的影响。方法取肠上皮细胞株IEC-6分别转染Ad-HSP70腺病毒载体和空腺病毒载体,蛋白质印迹法观察HSP70的表达。取IEC-6细胞分为正常对照组(不作任何处理)、缺氧/复氧组(给予缺氧/复氧处理)、Ad-HSP70转染组(转染Ad-HSP70腺病毒载体后,给予缺氧/复氧处理)。采用噻唑蓝比色法检测细胞内线粒体脱氢酶的活性,高效液相色谱分析法测定细胞能量代谢。结果与转染空腺病毒载体相比,转染Ad-HSP70腺病毒载体可显著增加细胞HSP70的表达。缺氧/复氧组细胞内线粒体脱氢酶的活性明显低于正常对照组(P<0.01),Ad-HSP70转染组该指标明显高于缺氧/复氧组(P<0.01)。缺氧/复氧组细胞内腺苷三磷酸含量较正常对照组显著下降,而腺苷二磷酸、腺苷一磷酸含量显著升高;Ad-HSP70转染组细胞能量指标与正常对照组相似(P>0.05),较缺氧/复氧组有明显改善(P<0.05或P<0.01)。缺氧/复氧组细胞能荷为0.615±0.060,明显低于正常对照组(0.748±0.012,P<0.01)、Ad-HSP70转染组(0.736±0.028,P<0.01)。结论Ad-HSP70腺病毒载体转染肠上皮细胞可诱导HSP70表达增加,显著提高细胞缺氧/复氧后胞内腺苷三磷酸的含量及细胞能荷,保护线粒体整体功能,提示线粒体是HSP70保护肠上皮细胞缺氧/复氧损伤的主要靶细胞器之一。