细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用

被引：1

作者：

李盈淳

汤志远

吴梦秋

王广基

郝海平

机构：

[1] 中国药科大学药物代谢动力学重点实验室

来源：

中国药科大学学报 | 2012年 / 43卷 / 06期

关键词：

p53; LC-MS/MS; 放线菌素D; 定量;

D O I：

暂无

中图分类号：

R96 [药理学];

学科分类号：

100602 ; 100706 ;

摘要：

建立细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法,应用该定量方法测定放线菌素D作用下细胞中p53表达量的变化。采用免疫沉淀法提取细胞样品中的p53蛋白,对提取后的样品进行酶解,基于肽图分析选择特异性肽段VEY-LDDR(m/z 455.22+-681.21+)作为定量肽段,设计合成肽段VEYIEDR(m/z 462.12+-695.21+)作为内标肽段,建立该肽段的LC-MS/MS定量方法,通过该肽段表征p53蛋白的量;应用该质谱定量方法对放线菌素D给药后的HCT116细胞中的p53蛋白的表达量进行测定。p53蛋白质谱定量方法学考证表明,方法的线性良好(R2=0.999 3),范围2.2～112.3 pmol/mL;专属性好,基质中无干扰成分,批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求;放线菌素D给药后细胞中p53蛋白的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加。建立的细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法可以准确的测定细胞内的p53蛋白表达量。

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页数：7

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[2]

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[3]

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