沙棘总黄酮、槲皮素对鸡成骨细胞碱性磷酸酶活性作用机制的体外研究

本试验旨在研究在体外培养条件下沙棘总黄酮(total flavones of Hippophae rham-noides,TFH)及槲皮素(quercetin)对爱拔益加(AA)肉鸡鸡胚成骨细胞碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的影响及其作用机制。成骨细胞分别采用基础培养液、基础培养液添加β-雌二醇(β-estradiol,E2)、TFH或槲皮素培养细胞24 h;细胞经雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂处理2 h,再分别于基础培养液、基础培养液添加TFH或槲皮素中培养24 h;细胞经胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂处理2 h,再分别于基础培养液、基础培养液添加TFH或槲皮素培养24 h;收集细胞,测定细胞ALP活性。基础培养液添加TFH、槲皮素,于孵育0、2、5、15、30、60 min 6个时间点收集细胞,ELASA法测定磷酸化胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular-regulated kinase,p-ERK)浓度。细胞采用基础培养液培养细胞24 h后经基础培养液、基础培养液分别添加E2、TFH、槲皮素培养细胞30min;经ER拮抗剂处理15 min,再分别于基础培养液、基础培养液添加E2、TFH或槲皮素培养30 min;收集细胞,ELASA法测定p-ERK浓度。结果表明:1)培养液添加TFH、槲皮素可以显著提高ALP活性(P<0.05),ER拮抗剂、MEK抑制剂可完全阻断这2种黄酮的作用(P<0.05);2)培养液添加TFH在培养后5、15 min,槲皮素在培养后2、5、15、30、60 min ERK磷酸化水平显著提高(P<0.05);3)培养液添加TFH、槲皮素可显著提高细胞ERK磷酸化水平(P<0.05),ER拮抗剂可完全阻断这一作用(P<0.05)。结果提示:TFH、槲皮素可以显著提高ALP活性和ERK磷酸化水平,具有雌激素样作用,二者可能是通过ER途径和ERK途径调节ALP活性。