新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

被引：8

作者：

王芳 ^{[1
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胡波 ^{[1
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任雪枫 ^{[2
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范志宇 ^{[1
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张则斌 ^{[1
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徐为中 ^{[1
]}

何孔旺 ^{[1
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机构：

[1] 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

[2] 江苏省动物疫病预防控制中心

来源：

华北农学报 | 2010年 / 25卷 / 03期

关键词：

家兔; γ-干扰素; 克隆; 重组杆状病毒;

D O I：

暂无

中图分类号：

S829.1 [兔];

学科分类号：

090502 [动物营养与饲料科学];

摘要：

用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达。用兔IFN-γELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL。细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg。

引用

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页数：5

共 9 条

[1]

兽医微生物学.[M].陆承平主编;.中国农业出版社.2001,

[2]

现代免疫学实验技术.[M].沈关心;周汝麟主编;.湖北科学技术出版社.1998,

[3]

Interferon: The pathways of discovery.[J].Alfons Billiau.Cytokine and Growth Factor Reviews.2006, 5

[4]

兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达 [J].