产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的 :大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株 (E .aerogenesEAM Z1) ,利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体 5 氟尿苷 (FUR)。方法 :补料分批培养产气肠杆菌 ,发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2 ,摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果 :葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要 ,又能维持培养液的pH ,培养 2 4h发酵液菌体湿重为 19 1g/L ,以尿苷 (UR)和 5 氟尿嘧啶 (FU)为底物 ,产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为 5 6 7% ;摇瓶培养基中加入 3 0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,静息细胞的酶转化率提高了10 2 % ;酶反应间隙流加底物UR浓度达 30mmol/L时 ,产物FUR的浓度最高 ,进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论 :通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌 ,其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。