慢性肾炎肾阴虚证cDNA消减文库的构建

被引：13

作者：

李玉萍 ^{[1
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罗仁 ^{[1
]}

赵晓山 ^{[2
]}

李俊 ^{[1
]}

聂晓莉 ^{[1
]}

机构：

[1] 南方医科大学南方医院中医科

[2] 广州中医药大学

来源：

上海中医药大学学报 | 2006年 / 01期

基金：

广东省科技计划;

关键词：

慢性肾炎; 肾阴虚证; 抑制性消减杂交; 基因组消减文库;

D O I：

10.16306/j.1008-861x.2006.01.021

中图分类号：

R277.5 [中医泌尿学];

学科分类号：

100221 [泌尿外科学];

摘要：

目的:采用抑制性消减杂交(SSH)技术构建汉族人慢性肾炎(CGN)肾阴虚证cDNA消减文库。方法:选择汉族人CGN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建CGN肾阴虚证消减文库。结果:用SSH方法筛选出了CGN肾阴虚证的差异cDNA片段,得到了386个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了CGN肾阴虚证的cDNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建CGN肾阴虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆CGN肾阴虚证相关基因奠定了基础。

引用

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页数：4

共 7 条

[1]

糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建 [J].