双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

被引：31

作者：

熊恒硕 ^{[1
]}

康俊梅 ^{[1
]}

杨青川 ^{[1
]}

孙彦 ^{[2
]}

唐克轩 ^{[3
]}

机构：

[1] 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

[2] 中国农业大学动物科技学院草地研究所

[3] 复旦大学生命科学院

来源：

中国草地学报 | 2008年 / 01期

关键词：

双价抗虫; 转基因植株; CryIA(a/c)基因; pta基因; 紫花苜蓿;

D O I：

暂无

中图分类号：

S541.9 [];

学科分类号：

摘要：

以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度OD600为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种"中苜1号",最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达。

引用

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页数：6

共 10 条

[1]

根癌农杆菌对苜蓿的转化及其特性 [J].