苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆

被引：5

作者：

陈雪松

张海瑜

高为民

朱坤

阚凤玲

杨苏声

机构：

[1] 中国农业大学生物学院微生物学系!北京

来源：

微生物学报 | 1999年 / 06期

基金：

高等学校博士学科点专项科研基金;

关键词：

苜蓿中华根瘤菌; 耐盐; 基因文库; 亚克隆;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.1999.06.002

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以耐盐的苜蓿中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍｍｅｌｉｌｏｔｉ）０４２Ｂ为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ的部分酶解，利用电洗脱方法回收１５～２５ｋｂ大小的ＤＮＡ片段。以碱法制备载体质粒ｐＬＡＦＲⅠ，用ＥｃｏＲⅠ将其切成线状，然后用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将回收片段与线状载体连接，利用包装蛋白进行包装后，感染大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）Ｓ１７１，构建了０４２Ｂ的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株，在０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的条件下，从２０００个菌落中筛选得到１２株０４２Ｂ的盐敏感突变株，以其中稳定的盐敏突变株ＧＺ１７为受体菌，利用两亲本杂交将含有０４２Ｂ的ＤＮＡ片段的ｐＬＡＦＲⅠ重组质粒转移到ＧＺ１７中，在含有四环素和０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆，获得了与耐盐有关的７ｋｂ长的ＤＮＡ片段。对该片段进行亚克隆，最终获得了４ｋｂ与耐盐有关的片段

引用

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