叶下珠提取物对体外四氯化碳损伤肝细胞的保护作用

目的:观察叶下珠不同溶剂提取物对体外四氯化碳损伤肝细胞的保护作用。方法:实验于2005-07/2006-09在湖南农业大学完成。①称取3份适量叶下珠药材,分别用水、体积分数为0.95的乙醇、体积分数为0.70的乙醇各回流提取3次,分别得到各自的提取物,实验时稀释到所需质量浓度(1,10,100g/L)。②称取叶下珠适量,用体积分数为0.70的乙醇回流提取3次,将其提取液浓缩至干,然后用200～300mL水溶解,其溶解液分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次提取,将各提取液浓缩制成干粉,得各自提取物,实验时稀释到所需质量浓度(1,10,100g/L)。③取生长良好的L-02细胞,制成单个细胞悬液以5×108L-1分别接种于96孔板和24孔板,培养24h后,分为正常组,损伤组,各提取物组。损伤组细胞用含有10mmol/L四氯化碳培养液培养4h。各提取物组预先加叶下珠各提取物干预1h后,再换成含有10mmol/L四氯化碳培养液,继续培养4h,收集上清液用来测谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛的含量以及用MTT法测定细胞的存活率。结果:①损伤组的谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平明显高于正常组,而经过叶下珠提取物预先处理过的细胞,其谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平显著低于损伤组,各提取物中以100g/L体积分数为0.70的乙醇回流提取物效果最好,而且各提取物对细胞的保护呈剂量依赖关系。②体积分数为0.70的乙醇提取物的不同溶剂提取物组谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平显著低于损伤组,对细胞的保护作用与剂量呈一定剂量依赖性关系,其中以100g/L乙酸乙酯提取物对细胞抗四氯化碳损伤作用效果最为明显。③MTT法测定结果表明,四氯化碳损伤后的损伤组细胞活性明显下降,仅为正常组的25.5%。而预先用叶下珠提取物处理过的细胞,其存活率明显高于损伤组,叶下珠体积分数为0.70的醇提物及其乙酸乙酯提取物组效果最为明显,且存在明显剂量效应关系。结论:叶下珠体积分数为0.70的乙醇提取物及其乙酸乙酯提取物对四氯化碳损伤肝细胞有很好的保护作用,其中以质量浓度为100g/L时,效果最为显著。