植物Ⅴ类几丁酶苦瓜同源基因(McChi5)的克隆及特征分析

苦瓜是一种病害很少的蔬菜作物。用 3′RACE方法从苦瓜叶片RNA中扩增了一个与烟草Ⅴ类几丁酶序列相似的片段 ,进一步用Y RACE方法扩增了相应的 5′端序列。经序列拼接 ,获得了植物Ⅴ类几丁酶苦瓜同源基因(McChi5 )的全长cDNA基因。该基因全长 1348bp ,含有一个 10 4 4bp的ORF。推测的蛋白质由 347个氨基酸组成 ,计算所得的分子量为 38.3kD ,等电点为 5 .77。同源性分析表明 ,McChi5蛋白与烟草V类几丁酶、拟南芥的推测几丁酶和类几丁酶蛋白、以及哺乳动物和细菌的一些几丁酶有序列相似性 ,并具有第 18家族糖基水解酶的保守域。Southernblotting表明 ,在苦瓜基因组中存在 2个拷贝的McChi5基因 ,同时也存在少数同源基因。RNAdotblotting分析表明 ,McChi5基因有组成性表达的特性 ,伤害处理对其表达的影响不明显。对McChi5基因可能的生物功能和应用作了进一步的讨论。