地龙和水蛭复方制剂干预后大鼠脑缺血耐受和基质金属蛋白酶9的表达

目的:观察地龙和水蛭复方制剂对缺血预处理诱导的脑缺血耐受的干预作用及对基质金属蛋白酶9表达的影响。方法:于2004-09/2005-02在四川大学华西医院外科实验室完成动物实验部分;于2005-03/05在华西医院移植免疫中心完成图像采集和分析部分。①选用健康雄性SD大鼠48只。随机分为3组:假手术组、预缺血组、预缺血+地龙和水蛭复方制剂组,每组16只。采用二次线栓法制备大鼠脑缺血耐受模型。预缺血+地龙和水蛭复方制剂组:缺血预处理10min,腹腔注射地龙和水蛭复方制剂(主要成分为地龙、水蛭,含生药1g,由牡丹江友搏药业有限责任公司提供,2mL/支,批号:040413-1)10mL/(kg·d),连续3d,3d后给予2h大脑中动脉阻塞,再灌22h后处死大鼠;预缺血组:不给药,余处理同预缺血+地龙和水蛭复方制剂组;假手术组:仅暴露解剖结构,不予10min缺血预处理,余同预缺血组。②各组取8只大鼠于术后清醒2h进行神经功能评分(04分,0分为无神经系统功能缺失;4分为不能自发行走,意识丧失)。③每组随机取5只大鼠,取脑,计算脑含水量[(湿重-干重)/湿重×100%]。④每组随机取5只大鼠,取脑,制切成。计算脑梗死体积(mm3)(各层梗死面积之和×层间隔)。⑤采用免疫组化染色和图像分析比较各组基质金属蛋白酶9蛋白表达。⑥计量资料差异比较采用方差分析。结果:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组术后各死亡1只,剔除后随机补充,最终有48只大鼠进入结果分析。①神经功能评分和脑含水量:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组大鼠两项指标均明显低于假手术组[神经功能评分:(2.01±0.21),(1.76±0.36),(2.31±0.68)分;脑含水量:(82.01±0.83)%,(78.92±0.76)%,(85.23±1.08)%,P<0.05]。预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于预缺血组(P<0.05)。②脑梗死体积和基质金属蛋白酶9蛋白表达:预缺血组和预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于假手术组[脑梗死体积:(142.79±17.84),(103.00±12.46),(198.32±19.56)mm3;基质金属蛋白酶9蛋白表达:12473.18±398.47,9185.00±176.32,15687.21±259.49,P<0.05]。预缺血+地龙和水蛭复方制剂组明显低于预缺血组(P<0.05)。结论:缺血预处理可诱导脑缺血耐受作用,基质金属蛋白酶9表达降低是其机制之一;地龙和水蛭复方制剂可进一步下调基质金属蛋白酶9表达,与缺血预处理具有协同作用,减轻再缺血后脑损伤。