卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与鼠HSP70融合蛋白的构建、表达及鉴定

被引：5

作者：

张果 ^{[1
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昌晓红 ^{[1
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石菁菁 ^{[2
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成夜霞 ^{[1
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李巍 ^{[3
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叶雪 ^{[1
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程洪艳 ^{[1
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付天云 ^{[1
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魏丽惠 ^{[1
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崔恒 ^{[1
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机构：

[1] 北京大学人民医院妇科肿瘤中心

[2] 北京市卫生局科教处

[3] 首都医科大学附属北京妇产医院

来源：

中国医药生物技术 | 2008年 / 05期

关键词：

抗体,抗独特型; HSP70热休克蛋白质类; 重组融合蛋白质类; 卵巢肿瘤;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100108 [医学免疫学];

摘要：

目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70（mHSP70）融合蛋白6B11ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性。方法根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列（NM010478）合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a（+）-6B11ScFv质粒后转化入E.coliDH5α,获得pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70重组质粒。将鉴定正确的pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coliBL21（DE3）,获得E.coliBL21（DE3）[pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70]重组菌株。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法进行鉴定和免疫活性检测。结果6B11ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符。SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符。复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9%,蛋白纯度达95%以上。蛋白质印迹分析证实6B11ScFv/mHSP70融合蛋白相对分子质量为104000,ELISA检测表明其具有6B11ScFv和mHSP70的免疫活性。结论构建表达的6B11ScFv/mHSP70融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础。

引用

页码：336 / 342

页数：7

共 14 条

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