含hITF启动子的荧光素酶报告质粒的构建及活性检测

被引：1

作者：

王臻

王林

万千雪

金星

梁光萍

彭曦

机构：

[1] 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

来源：

第三军医大学学报 | 2010年 / 32卷 / 10期

基金：

国家自然科学基金重点项目;

关键词：

肠三叶因子; 启动子; pGL-3basic; HEK-293细胞;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2010.10.003

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的构建含有人肠三叶因子(intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性。方法采用PCR技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5kb的含hITF基因启动子片段(-2331/+53),而后在此基础上构建了10个不同长度的启动子序列至pGL-3basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒转染HEK-293细胞并在48h后检测其荧光素酶活性。结果插入的hITF启动子片段测序结果显示正确,-500/+53,-400/+53和-300/+53片段活性介于0.023～0.026之间,-200/+53,-100/+53和-50/+53活性介于0.0032～0.0042之间,明确了最小活性功能域位于-300/+53区域,-300/-200区域对hITF转录起始起关键性作用。结论成功构建了含hITF启动子的萤火虫荧光素酶报告基因质粒,鉴定出人肠三叶因子(hITF)启动子活性位于-300/-200区域。

引用

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页数：4

共 8 条

[1]

乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究 [J].